Elektroforéza: na čo slúži, na čo slúži a ako sa robí

Obsah

• Načo to je
• Ako sa to robí
• Druhy elektroforézy
• 1. Elektroforéza hemoglobínu
• 2. Proteínová elektroforéza

Elektroforéza je laboratórna technika uskutočňovaná s cieľom separácie molekúl podľa ich veľkosti a elektrického náboja, aby bolo možné stanoviť diagnózu chorôb, overiť expresiu proteínov alebo identifikovať mikroorganizmy.

Elektroforéza je jednoduchý a lacný postup, ktorý sa používa v laboratórnej rutine a vo výskumných projektoch. Podľa účelu elektroforézy môže byť potrebné napríklad vykonať ďalšie testy a vyšetrenia, aby sa zistila diagnóza.

Načo to je

Elektroforéza sa môže uskutočňovať na rôzne účely, a to tak vo výskumných projektoch, ako aj v diagnostike, pretože ide o jednoduchú a nízkonákladovú techniku.Môže sa teda vykonať elektroforéza na:

• Identifikujte vírusy, huby, baktérie a parazity, pričom táto aplikácia je vo výskumných projektoch bežnejšia;
• Test otcovstva;
• Skontrolujte expresiu proteínov;
• Identifikujte mutácie, ktoré sú užitočné napríklad pri diagnostike leukémie;
• Analyzujte typy cirkulujúceho hemoglobínu, ktoré sú užitočné pri diagnostike kosáčikovitej anémie.
• Posúďte množstvo bielkovín prítomných v krvi.

Podľa účelu elektroforézy môže byť na vykonanie diagnózy potrebné vykonať ďalšie doplňujúce testy pre lekára.

Ako sa to robí

Na uskutočnenie elektroforézy je potrebný gél, ktorým môže byť podľa účelu polyakrylamid alebo agaróza, elektroforetický pufor a nádoba, marker molekulovej hmotnosti a fluorescenčné farbivo, navyše k UV alebo LED svetelnému zariadeniu známemu tiež ako transiluminátor.

Po príprave gélu je potrebné umiestniť konkrétny predmet tak, aby sa jamky vytvorili v géli, ľudovo nazývanom hrebeň, a nechať gél stuhnúť. Keď je gél hotový, stačí do jamiek naniesť látky. Na tento účel musí byť do jednej z jamiek umiestnený marker molekulovej hmotnosti, pozitívna kontrola, čo je látka, o ktorej je známe, že to je, negatívna kontrola, ktorá zaručuje platnosť reakcie, a vzorky, ktoré majú byť analyzované. Všetky vzorky musia byť zmiešané s fluorescenčným farbivom, aby bolo možné vizualizovať pásy na transiluminátore.

Gél so vzorkami sa musí vložiť do nádoby na elektroforézu, ktorá obsahuje špecifický tlmivý roztok, a potom sa prístroj zapne tak, aby v ňom bol elektrický prúd a následne rozdiel potenciálov, čo je dôležité pre separačné častice podľa ich obsahu. zaťaženie a veľkosť. Elektroforetická doba chodu sa líši podľa cieľa postupu a môže trvať až 1 hodinu.

Po stanovenom čase je možné zobraziť výsledok elektroforetického priebehu transiluminátora. Keď je gél umiestnený pod UV alebo LED svetlo, je možné vizualizovať pruhovanie: čím väčšia je molekula, tým menšia je jej migrácia, približovanie sa k jamke, zatiaľ čo ľahšia je molekula, tým väčší je migračný potenciál.

Aby sa reakcia mohla validovať, musia sa vizualizovať pásy pozitívnej kontroly a v negatívnej kontrole sa nesmie vizualizovať nič, pretože inak to naznačuje, že došlo ku kontaminácii, a musí sa opakovať celý proces.

Druhy elektroforézy

Elektroforéza sa môže uskutočniť na rôzne účely a podľa jej účelu sa môže použiť niekoľko druhov gélu, najbežnejším je polyakrylamid a agaróza.

Elektroforéza na identifikáciu mikroorganizmov sa bežnejšie vykonáva vo výskumných laboratóriách, avšak na diagnostické účely sa môže elektroforéza použiť na identifikáciu hematologických chorôb a chorôb, ktoré sa vyvíjajú so zvýšením množstva proteínov, čo sú hlavné typy elektroforézy:

1. Elektroforéza hemoglobínu

Elektroforéza hemoglobínu je laboratórna technika uskutočňovaná na identifikáciu rôznych typov hemoglobínu cirkulujúcich v krvi, čo umožňuje identifikovať prítomnosť chorôb súvisiacich so syntézou hemoglobínu. Typ hemoglobínu sa identifikuje pomocou elektroforézy pri špecifickom pH, ideálne medzi 8,0 a 9,0, so vzorom pásov, ktorý sa dá porovnať s normálnym vzorcom, čo umožňuje identifikáciu abnormálnych hemoglobínov.

Na čo sa vyrába: Hemoglobínová elektroforéza sa vykonáva na vyšetrenie a diagnostiku chorôb súvisiacich so syntézou hemoglobínu, ako je kosáčikovitá anémia a choroba hemoglobínu C, okrem toho, že sú užitočné pri diferenciácii talasémie. Naučte sa, ako interpretovať elektroforézu hemoglobínu.

2. Proteínová elektroforéza

Elektroforéza bielkovín je vyšetrenie, ktoré požaduje lekár na vyhodnotenie množstva bielkovín cirkulujúcich v krvi, a teda na identifikáciu chorôb. Toto vyšetrenie sa vykonáva zo vzorky krvi, ktorá sa odstredí, aby sa získala plazma, časť krvi pozostávajúca okrem iných látok z bielkovín.

Po elektroforéze je možné vizualizovať obrazec pruhov a následne graf, v ktorom je uvedené množstvo každej frakcie proteínov, čo je pre diagnostiku zásadné.

Na čo sa vyrába: Elektroforéza proteínov umožňuje lekárovi vyšetriť výskyt mnohopočetného myelómu, dehydratácie, cirhózy, zápalu, ochorenia pečene, pankreatitídy, lupusu a hypertenzie podľa pásmového profilu a grafu uvedeného v správe o vyšetrení.

Pochopte, ako sa to robí, a ako pochopiť výsledok elektroforézy bielkovín.